Chondrex 公司提供捕獲ELISA kit,用于檢測細胞培養上清及小鼠血清中的HMGB1水平。試劑盒包含標準品及足夠的試劑用于檢測40個樣品（復孔）

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更新時間：2025-06-29

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Chondrex

脂多糖弗氏佐劑右旋糖苷腎炎稀釋液風濕性關節炎（CAIA) 膠原酶檢測膠原檢測風濕性關節炎模型（CIA) 佐劑組織染色蛋白分析 HMGB 膠原酶膠原抗體檢測盒抗體全部產品 HMGB1

產品介紹

HMGB(高遷移率族蛋白B1) zui近被認為是內毒素的晚期致命因子介質，并被普遍認為是一種炎癥介質，在急性的臨床炎癥疾病中起到至關重要的作用。

HMGB1 蛋白由216個氨基酸組成，小鼠、大鼠、牛、及人99% 的HMGB1氨基酸序列是相同的。HMGB1蛋白由三個結構域組成。分別為“A Box (氨基酸序列：9-85)”、B box(氨基酸序列：88-162)和一個帶負電荷的羧基端（氨基酸序列：186-216）。此外，B-box 參與炎癥反應活性而A Box 則被認為是作為一個拮抗劑的功能。

許多證據表明HMGB在炎癥反應免疫應答中發揮的重要性。例如，已有研究表明，HMGB可以有許多細胞主動分泌，例如：巨噬細胞被LPS ,TNF 和IL-1 刺激后，主動分泌HMGB1蛋白，也可由壞死細胞被動釋放。事實上，感染性休克死亡的病人血清中的HMGB1蛋白水平高于敗血癥病人。同樣，在敗血癥動物模型及膠原誘導的關節炎模型血清中，也可檢測到高水平的HMGB蛋白。關于這個蛋白的功能，HMGB1蛋白被認為起到促進細胞釋放TNF和IL-1 細胞因子的功能及與LPS結合協同增加外周血單核細胞產生IL-6。總之，這些現象表明，HMGB1在炎癥反應中起到重要作用。

Chondrex 公司提供捕獲ELISA kit,用于檢測細胞培養上清及小鼠血清中的HMGB1水平。試劑盒包含標準品及足夠的試劑用于檢測40個樣品（復孔）

試劑盒組成

組成	數量	規格	保存溫度
HMGB1 標準品	2瓶	50ul/瓶	-20°C
捕獲抗體（抗-HMGB1 單抗）	1瓶	100ul/瓶	-20°C
檢測抗體（抗-HMGB1 單抗）	1瓶	凍干粉	-20°C
溶液A-捕獲抗體稀釋緩沖液	1瓶	10ml	-20°C
溶液B-樣品/標準品稀釋緩沖液	1瓶	20ml	-20°C
溶液C-檢測抗體稀釋緩沖液	1瓶	10ml	-20°C
溶液D-鏈親和素稀釋緩沖液	1瓶	20ml	-20°C
鏈親和素	2瓶	50ul	-20°C
TMB 溶液	1瓶	12 ml	4°C
終止液	1瓶	12 ml	-20°C
洗液，20X	1瓶	10ml	-20°C
ELISA 板	1個	96孔板（8x12 ）	-20°C

注：

推薦樣品和標準品都進行復孔檢測。
剩于的捕獲抗體、檢測抗體、鏈親和素需儲存于-20°C。
20X的洗液（Wash buffer）低溫儲存會結晶。如果有結晶，將Wash buffe 置于水浴中溫育，直至晶體全部溶解。
緩沖液稀釋前用移液器測量的準確體積。（提供足夠的緩沖液）。
該試劑盒可用于檢測小鼠血清和細胞培養上清中HMGB1蛋白水平。用于分析人的血清HMGB1水平時，應特別注意。因為已有研究報道，有自身免疫疾病的病人產生的針對HMGB1的抗體在血清中占9-89%。這些血清中的多抗的存在，封閉了HMGB1抗原表位，從而影響試劑盒中捕獲抗體和檢測抗體對HMGB的結合。因此，在使用試劑盒之前對病人的疾病背景了解，至關重要。

操作程序：

1 加入捕獲抗體：將捕獲抗體（100ul）用10ml 溶液A 稀釋后，每孔加入100ul稀釋液，

4℃ 孵育overnight。

2 標準品稀釋液的準備：推薦的標準品濃度梯度為：1.6-100ng/ml。在標準品（1瓶）中加入950ul稀釋液溶液B，則終濃度為100ng/ml。取250ul 100ng/ml稀釋液加入250ul溶液 B,則終濃度為50ng/ml。依次類推，重復5次，依次分別配成25 ng/ml，12.5ng/ul,6.25 ng/ml,

3.1 ng/ml,1.6ng/ml的稀釋液。100ng/ml 的儲存液不能夠在后續試驗中應用。倒掉多余的剩余標準品稀釋液。推薦在每次試驗時用新鮮的標準品稀釋液。

3 樣品稀釋液的準備：4℃1000 rpm離心3min 去除一些不溶物和脂類物質，取上清作為試驗樣品。如果HMGB1蛋白水平超過100ng/ml，請配置更高的稀釋度的樣品稀釋液。

4 檢測抗體的準備：用5ml溶液C稀釋檢測抗體（1瓶）

5 洗脫緩沖液的稀釋：用950ml 蒸餾水稀釋50ml 20x洗脫儲存液，配成1x 洗脫液。用1x 洗脫液至少洗版3次（或用自動洗版機）。甩去液體，倒扣板，置干凈的吸水紙上，去除多余的液體。不要讓板子*變干。

6 加入標準品，樣品和檢測抗體：混勻標準品，檢測樣本和檢測抗體。按圖1，空白孔加入50ul 溶液B，標準品和樣品加到對應的孔中。加入50ul 稀釋的檢測抗體到各孔，用移液器（或振蕩儀）上混勻檢測抗體稀釋液和標準品/樣品稀釋液。用封板膜封板，37 ℃孵育1小時，此后4 ℃ overnight。