BD biocoat 基質膠和細胞檢測系統

產品貨號：354230  354234  356230  356231  356234  356235  356237       

儲存和運輸：-20℃儲存，干冰運輸。

操作指南：

BD采用技術，從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中分離出BD Matrigel 基底膜基質，其主要成分由層粘連蛋白，IV型膠原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等組成，還包含生長因子和基質金屬蛋白酶等。BD Matrigel 基底膜基質在室溫條件下，聚合形成具有生物學活性的三維基質，模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養和分化，以及對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。

BD Matrigel 基底膜基質形成的三維培養機制，可促進上皮細胞、肝細胞、Sertoli細胞、黑色素瘤細胞、血管內皮細胞、甲狀腺細胞及毛囊細胞等的貼壁與分化。同時，Matrigel 還能影響乳腺上皮細胞的蛋白表達，支持外周神經的新生和牛輸卵管上皮細胞的分化，高濃度的Matrigel 適用于研究體內血管生成和腫瘤細胞遷移及腫瘤模型的建立等。

Matrigel 基質會有色差變化（淡黃色到深紅色），是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的。但是與5%CO2平衡后色差即會減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無菌環境中進行。試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭，并自然干燥。應使用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。細胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質層表面生長，也可在1mm厚度的Matrigel三維基質內生長。過度稀釋的Matrigel會形成非膠質的蛋白層，也可以用于細胞貼壁，但不能用于細胞的分化研究。

注意：

1.可將凍融后的Matrigel分裝在多個小管，所有分裝均需用預冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。

2.Matrigel在22-35℃溫度環境下快速成膠，因此溶解時在4℃冰上Overnight凍融（4℃時會隨著溫度的上升部分成膠）。所有用品在使用前需置于冰浴，必須使用預冷的移液管、吸頭及小管操作Matrigel。成膠后的Matrigel可以在4℃24-48小時后重新呈液態。

推薦包被與成膠方法：

注意：為了保證Matrigel基質膜的成膠性能與穩定性，稀釋濃度不應低于1:3，可用無血清培養基稀釋，Matrigel成膠后立即使用。

薄膠成膠方法：

凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質成勻漿狀。

將需要使用的培養板置于冰上，加入濃度為50ul/cm2生長面積的Matrigel基質。

在37℃放置30分鐘，即可使用。

厚膠成膠方法：

凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質成勻漿狀。將需要使用的培養板置于冰浴，將培養的細胞與Matrigel基質混合，用移液槍頭使其懸浮于基質中。加入濃度為150-200ul/cm2生長面積的Matrigel基質。在37℃放置30分鐘，可成膠。可以加入細胞培養的基質，可以是細胞直接生長在膠表面。

薄層包被方法：

凍融后，用預冷的移液槍頭混勻Matrigel基質成勻漿狀。根據使用需要，采用無血清培養基稀釋Matrigel基質，根據實驗需要確定*包被濃度。將稀釋的Matrigel基質包被于所需的培養器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育1小時。去除未結合的Matrigel，用無血清培養基輕輕地沖洗。用BD細胞回收劑（354253）或離散酶（354235）可降解Matrigel基質，冰浴7小時候回收得到細胞。